В основе метода иммуноферментного анализа (ИФА) — высокая избирательность и специфичность реакций «антиген-антитело». В качестве мишеней для тест-систем ИФА могут использоваться белки, иммуноглобулины, гормоны, липопротеины и прочие высокомолекулярные биологические соединения.
Три этапа иммуноферментного анализа
Первый этап. В лунку планшета, на поверхности которой сорбирован белок-антиген инфекционного агента или антитело к нему, вносится исследуемый биоматериал, обычно это сыворотка крови. При наличии в биоматериале антител к данному инфекционному агенту либо самих инфекционных агентов (антигенов) они формируют иммунные комплексы «антиген-антитело», которые выявляются на последующих этапах исследования.
Второй этап. В лунку вносят конъюгат — комплекс из антитела и фермента, способный связываться с иммунными комплексами «антиген-антитело». Если на первой стадии процесса такие иммунные комплексы образовались, то конъюгат с ними связывается.
Третий этап. В лунку добавляется раствор хромогена. Это бесцветное вещество окрашивается после расщепления присутствующим в ячейке ферментом. Таким образом, в лунке образуется окрашенный комплекс в случае присутствия всех элементов цепочки. Будучи пропорциональной предшествующей иммунологической реакции, произошедшая цветовая реакция позволяет не только выявить, но и количественно измерить искомый антиген или антитело.
Рекомендации по проведению ИФА
- Для ИФА нужны прозрачные сыворотки, так как при учёте результатов учитывается оптическая прочность.
- Каждый образец сыворотки необходимо отбирать новым наконечником.
- При наличии в сыворотке осадка необходимо осветлить её в центрифуге.
- Не допустимо использовать для ИФА сыворотки с выраженным гемолизом или бактериальным проростом.
- Нельзя повторно замораживать образцы сыворотки.
- Важно готовить реагенты к постановке анализа в строгом соответствии с инструкцией.
- При проведении ИФА нельзя применять реагенты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов.
- Работать с компонентами тест-систем и исследуемыми образцами можно только в перчатках. Когда работа окончена, нужно тщательно вымыть руки.
- ТМБ и РХ — светочувствительные реагенты. Их необходимо хранить в защищенном от света месте.
- Для работы с реагентами, исследуемыми и контрольными образцами использовать одноразовые наконечники для дозаторов.
- Инкубация планшетов проводится при температуре 37±1 °С. Недопустимо проведение анализа при температуре в помещении ниже 17 °С и выше 27°С.
Заказать тест-системы для ИФА можно в компании Litolab . Также в нашем каталоге отдельно представлены реагенты и расходные материалы для проведения ИФА-диагностики.
